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如何正確使用40ul全裙邊384孔PCR板
40μL全裙邊384孔PCR板?的正確使用需嚴格遵循選型、加樣、密封、上機與后處理全流程規范,以確保實驗結果的準確性與可重復性。
一、使用前準備
耗材檢查?:確認板體無裂紋、變形或污染,選擇無DNase/RNase/PCR抑制劑的無菌板,開封后盡快使用。
環境控制?:在超凈臺內操作,紫外消毒30分鐘;全程佩戴無粉手套和口罩,避免指紋或氣溶膠污染。
試劑準備?:MasterMix冰上解凍、輕柔混勻并短暫離心(1000×g,1min),建議多配10%以防移液損耗。
布板設計?:繪制384孔布板圖,標注樣本、引物/探針、內參、陰性/陽性對照及技術重復(≥3次);邊緣孔優先設置對照以抵消邊緣效應。
工具校準?:多通道移液器(8/16通道)校準至2–40μL量程,使用適配384孔的低吸附吸頭。
二、加樣操作(穩、準、輕、無氣泡)
方向定位?:雙切角朝向左上方(A1孔側),確保與儀器模塊和移液頭方向一致。
加樣順序?:
先加MasterMix:吸頭距孔底1–2mm,緩慢推出(2–3s),每通道更換吸頭;
后加模板/引物:輕柔吹吸2–3次混勻,禁止劇烈震蕩;同一樣本組連續加樣以減少交叉污染。
體積控制?:單孔推薦體積2–25μL,最大不超過30μL,防止熱封時溢出。
除氣泡?:加樣后立即短離心(2000–3000×g,2–5min),使用384孔適配器排盡氣泡。
三、密封處理(防蒸發+保熒光)
封膜選擇?:使用光學透明粘性封板膜(qPCR專用,高透光、低熒光)。
貼膜操作?:
膜從一端對齊板邊,緩慢平整貼合,避免褶皺、氣泡或漏封;
用壓板器或卡水平+垂直各壓2次,重點壓實四角與邊緣。
強化密封?:
可選熱封儀(105–110℃,2–3s);
或冷封后離心(500×g,1min)驗證密封性。
禁忌?:禁用普通封口膜或保鮮膜,因其透光差、易揮發且干擾熒光信號。
四、上機與擴增設置
上機操作?:將板平穩放入384孔加熱模塊,雙切角與儀器定位槽對齊,確保貼合;關閉熱蓋,壓力適中以防壓碎。
參數設置示例(qPCR)?:
預變性:95℃,2min(1cycle);
擴增循環:95℃,5s;60℃,15–30s(熒光采集);40–45cycles;
熔解曲線(可選):60–95℃梯度升溫采集;
啟用ROX參比染料校正孔間信號差異。
運行注意?:避免中途開蓋;運行結束后待模塊降溫至≤40℃再取板。
五、實驗后處理
短期保存?:4℃避光,≤24小時;
長期保存?:-20℃(避免反復凍融);
廢棄處理?:高壓滅菌(121℃,20min)后按生物垃圾處理;不可重復使用。
六、常見問題與規避

注:以上供參考!
本生產品涵蓋有熒光定量PCR耗材(八聯管,單管,96孔板,384孔板,封板膜,輔助器等),ELISA試劑盒,移液器吸嘴,離心管,凍存管,培養皿,培養板,培養瓶,吸頭,儀器及手套,培養基,抗體,血清,色譜耗材,針頭過濾器及實驗室常用耗材。品種類超過萬種,廣泛應用于科研院校、中心實驗室、分子生物學等科研域。